培养基灭菌是否彻底，影响因素很多，除了培养基内杂菌的种类和数量，灭菌温度的高低，时间长短外，还取决于：

1. 营养成分的保持

湿热灭菌时，微生物被杀死的同时，培养基的营养成分也遭到了定的破坏，特别是氨基酸和维生素。如在121℃，仅20min，就有59%的赖氨酸和精氨酸及其他碱性氨基酸被破坏，蛋氨酸和色氨酸也有相当数量被破坏。在热的作用下某些营养成分还可能因受热而相互之间发生反应，造成培养基中原有营养成分的数量变化，因而影响培养基质量。

2. 微生物的耐热性

细菌芽孢的热阻较大，灭菌所需要的时间取决于把细菌芽孢减少到所规定数目的时间。

3. pH值

pH值对微生物的耐热性影响很大。pH值介于6.0~8.0时，微生物不易死亡。pH<6.0时，微生物比较容易死亡，此时H+很容易渗入微生物的细胞，从而改变细胞的生理反应，促使其死亡。所以培养基的pH越低，所需的时间也越短。

4. 培养基成分

油脂、糖类及蛋白质等组成的高浓度有机物会包于细胞的周围形式层薄膜、影响热的传导。而高浓度的盐类、色素则削弱其耐热性，灭菌较易。例如：大肠杆菌在水中加热至60-65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡，在30%糖液中需30分钟才死亡。般糖类含量较多的时候好选用115℃，30分钟；般的培养基可选择121℃，20分钟。

5. 泡沫

泡沫中的空气形成隔热层，使热量难以渗透进去，杀死其中的杂菌。

6. 颗粒

颗粒小，容易灭菌，颗粒大，则难灭菌。对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基，可用粗滤的方法（不应影响培养基质量）予以除去，培养基结块会造成培养基灭菌的不彻底。

7. 灭菌锅内空气是否排净

这个是影响灭菌是温度和压力比例关系的要点，同样达到了相同的压力的情况下，如果空气未能排净，也就是说不是纯蒸汽灭菌，此时的温度不定能达到目的要求，会严重影响灭菌效果。

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